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RNAi_RNAi

概述

RNA干扰(RNAi)是一种由双链RNA介导,由特定酶参与的特异性基因沉默现象,通过阻碍特定基因的翻译或转录来抑制基因表达。RNAi是真核生物中普遍存在的抗病毒入侵、抑制转座子插入和调控基因表达的监控机制,目前还被普遍应用于分子生物学的基因功能研究。


作用机制

RNAi的作用机制包括3个阶段,起始阶段、执行阶段和倍增阶段,其中倍增阶段仅存在于植物中。

1.起始阶段——小双链RNA分子产生

外源进入的长双链RNA被Dicer酶特异识别,以一种ATP依赖的方式逐步切割,形成长约20个核甘酸的双链siRNA,且每条链的3'端都带有2个悬垂的碱基。Dicer酶是一种多功能酶,识别dsRNA,并通过其RNA结合域与之结合。解开dsRNA并通过一种序列特异性的方式进行切割。

2.执行阶段

靶mRNA降解或转录抑制引起的基因特异性失活剪切形成的siRNA与酶复合物RISC结合,形成siRNA诱导沉默复合物(siRISC),进而引起靶RNA的降解。


临床应用

1.基础研究中的应用

在针对基因功能研究的过程中,需要对特定基因进行敲除或降低其表达,从而明确其所发挥的生物学功能。相比传统的基因敲除技术,RNAi具有投入少、周期短、操作简单、干扰效率高等优势。足目前功能基因组学研究的重要的工具之一。基本的研究策略就是通过RNAi干扰靶mRNA后,通过观察细胞的表型和生物学特性的改变,并利用各种分子生物学方法对基因的表达及功能进行分析。目前,RNA干扰技术在真菌、植物、线虫、果蝇及哺乳动物的基因功能研究中均发挥了重要作用。

2.临床应用

在病毒引起的感染性疾病中的应用:RNA干扰是生物体抵御病毒入侵的手段,因而也被研究用于治疗病毒引起的感染性疾病。RNAi主要针对的是病毒入侵、复制所必需的基因或者是在病毒生命周期过程中起到重要功能的宿主基因。